课程代码: 10271823
课程名称: 生物电镜技术
英文名称: Techniques of Biological Electron Microscope
课程类型: 学科基础课
课程性质: 选修课
授课对象: 白求恩医学班
开课学期：第2短学期
课程学时：8学时
选用教材：自制PPT电子教案
实验地点：病理生物学教育部重点实验室电镜室
执 笔 人: 崔 丽（教 授）
审 核 人：王建伟（教 授）
编写单位: 病理学系
编写日期: 2010年9月
一、实验教学目标
《生物电镜技术》课程的实验教学主要是使白求恩医学班员工掌握透射电镜和扫描电镜的基本结构、操作步骤及样品制备的方法。学会观察心脏、大脑、肾脏、肝脏等器官的正常超微结构和基本病变。
实验教学采用教师示教、员工动手操作和教师指导相结合的教学方式。实验每组5～6人，由一名教师指导完成实验。
通过实验教学使员工基本掌握透射电镜的超薄切片技术和负染技术，掌握心脏和大脑的超微结构特征。并能将该技术应用于学位论文的实验工作中，为将来从事基础医学和临床医学的科研工作打下良好基础。达到提高员工的实验动手操作能力，培养员工的严谨科研作风和综合思维能力的目的。
二、实验学时分配
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序号
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实验项目名称
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实验教学类型
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实验性质
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实验学时
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1
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透射电镜操作和电镜摄影
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验证性实验
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必修
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1
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2
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超薄切片技术
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验证性实验
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必修
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3
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3
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扫描电镜的样品制备
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验证性实验
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必修
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0.5
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4
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电镜暗室技术
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验证性实验
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必修
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1
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5
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器官超微结构的观察
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验证性实验
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必修
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2.5
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总计
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8
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三、实验教学内容
实验一 透射电镜操作和摄影（1学时）
Operations and photography of transmission electron microscope
【实验要求】
掌握：透射电镜的摄影步骤和注意事项。
熟悉：透射电镜使用的操作步骤。
了解：透射电镜的基本结构。
【实验内容】
1．教师介绍透射电镜的基本结构（主要是电子光学系统）
2．教师示教透射电镜使用的操作步骤（加高压、上样品、开灯丝、样品台控制杆、选择放大倍数、调焦距、照相、数据显示屏内容）
3．员工每人上机选择视野照相，教师根据员工所照电镜底片的图像效果记录实验操作的成绩。
【仪器设备】
JEM-1200EX型透射电子显微镜
实验二 超薄切片技术（3学时）
Ultra-thin sectioning technique
【实验要求】
掌握：大鼠全身灌流固定的方法和注意事项；超薄切片技术中取材的要领和注意事项。
熟悉：超薄切片技术的基本操作步骤和注意事项。
【实验内容】
1．教师示教大鼠全身灌流固定的方法（麻醉动物、解剖动物、经左心室灌流固定）。
2．教师示教大鼠各器官的取材部位和注意事项。
3．员工动手操作进行大鼠全身灌流固定，每人选取一种器官取材、修块和后固定。教师根据员工操作情况记录实验成绩。
4．教师示教样品脱水、浸透、包埋步骤和注意事项。
5．教师提问和示教切片、染色步骤和注意事项，教师根据员工回答问题和观看示教情况记录实验成绩。
【仪器设备】
LKB-Ⅲ型超薄切片机
实验三 扫描电镜的样品制备（0.5学时）
Sample preparation of scanning electron microscope
【实验要求】
掌握：扫描电镜的样品制备步骤。
了解：扫描电镜的基本结构；扫描电镜使用的操作步骤。
【实验内容】
1．教师示教扫描电镜的基本操作步骤
2．教师提问和示教扫描电镜样品制备过程（取材、清洗、固定、脱水、干燥、镀膜）和注意事项。教师根据员工回答问题和观看示教情况记录实验成绩。
【仪器设备】
1．X-650型扫描电子显微镜
2．HCP-2型临界点干燥仪
3．IB-3型离子溅射仪
实验四 电镜暗室技术（1学时）
Electron microscope darkroom technique
【实验要求】
掌握：电镜照片的放大技术和遮挡技术；电镜照片放大倍数的计算方法。
熟悉：电镜底片冲洗方法。
了解：暗室的基本设备和常用试剂。
【实验内容】
1．教师示教电镜底片的冲洗方法和注意事项
2．教师示教电镜照片的放大和遮挡技术
3．员工动手进行电镜照片放大的操作，教师根据员工所冲洗的电镜照片效果记录实验操作成绩。
【仪器设备】
放大机
实验五 器官超微结构的观察（2.5学时）
Observation of organs’ ultrastructure
【实验要求】
掌握：心脏中心肌组织的正常超微结构特征和心肌缺血时心肌细胞超微结构的病变；大脑的正常超微结构特征和部分超微结构的病变。
熟悉：肝脏的正常超微结构特征；肾脏的正常超微结构特征。
【实验内容】
1．教师示教透射电镜下肝脏中肝小叶的超微结构特征
2．教师示教透射电镜下肾脏中皮质迷路的超微结构和部分肾小球的基本超微结构病变
3．员工动手操作透射电镜观察心肌组织正常超微结构和病变心肌组织的超微结构特征
4．员工动手操作透射电镜观察大脑皮质或海马组织的正常超微结构特征和部分超微结构的病变。教师根据员工对器官的识别情况记录实验操作的成绩。
5．员工自行观察电镜超微结构照片集。教师采取口试方式，根据员工对某些超微结构的识别情况记录成绩。
【仪器设备】
JEM-1200EX型透射电子显微镜
四、实验成绩考核与评定方式
本课程的实验课成绩占总成绩的25%。包括超薄切片技术（6%+3%）、透射电镜操作和摄影（4%）、透射电镜下重要器官超微结构的观察（5%）、电镜超微结构照片集口试（2%）电镜暗室技术（3%）、扫描电镜样品制备（2%）。成绩评定采取实验课中示教和操作现场考核方式和根据员工动手操作进行电镜摄片、电镜照片冲洗的结果考核相结合的方式。
对实验成绩不合格者及实验缺席者，本课程将不准予通过。
